气相色谱和高效液相色谱的适用对象及优缺点
1、气相色谱仪所能直接分离的样品是可挥发、且热稳定的,沸点一般不超过500℃。据有关资料统计,在目前已知的化合物中,有20%~25%可用气相色谱仪直接分析,其余原则上均可用高效液相色谱仪分析。也就是说气相色谱仪的分析对象远没有高效液相色谱仪多。
2、而高效液相色谱由于是以液体作为流动相,只要被分析的物质在选用的流动相中有一定的溶解度,便可以分析,所以适用性广,不受样品挥发性和热稳定性的限制,特别适合于那些沸点高、极性强、热稳定性差的化合物。
3、一)应用范围不同 气相色谱法 分离能力好、灵敏度高、分析速度快、操作方便等。受技术条件的限制,沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析,一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采用衍生化法或裂解法。
高效液相色谱仪包括哪五个系统?
分离系统;色谱柱:对样品进行分离,是整个色谱系统的心脏,它的质量优劣直接影响到分离的效果。检测系统;检测器:将色谱柱连续流出的样品组分转变成易于测量的电信号,被数据系统接收,得到样品分离的色谱图。数据处理和记录系统;对色谱数据进行处理,并参与HPLC仪器的自动控制。
液相:高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统组成。进样系统一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作,进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。输液系统该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。
气相色谱仪的流动相:(1)流动相为惰性气体。(2)组分与流动相之间无亲合作用力,只与固定相作用。高效液相色谱仪的流动相:(1)流动相为液体。(2)流动相与组分之间有亲合作用力,为提高柱的选择性和改善分离度增加了因素,对分离起很大作用。(3)流动相种类较多,选择余地大。
分析方法通常包括五个主要部分:限度、样品处理、试验参数、计算方法和系统适用性试验。在HPLC方法中,系统适用性试验至关重要,它评估仪器的灵敏度、进样重复性或特定组分的分离度是否符合要求,以确保分析方法的顺利执行。
结合实验数据和文献进行分析 根据实验数据和文献知识,对色谱图进行深入分析。例如,通过比较实验数据与文献中报道的数据,可以验证化合物的身份,进一步了解化合物的性质和行为。
高效液相色谱系统主要由流动相储液瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录仪组成,其整体 组成类似于气相色谱,但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。高效液相色谱的输液泵要求 输液量恒定平稳,进样系统要求进样便利、切换严密。
高效液相色谱仪原理及操作步骤
准备样品:将需要分析的样品进行适当的预处理,如提取、纯化等,以满足分析要求。(2)配置流动相:根据样品性质和分析需求,选择合适的流动相,并配置成所需的浓度。(3)安装色谱柱:将色谱柱安装在仪器系统中,并确保其与进样器、检测器等部件连接紧密。
操作步骤包括仪器准备、柱子配置、样品预处理、进样处理、运行条件和结果解读。 仪器准备:确保仪器正确连接电源,冷却系统运行正常,检查流动相充足和清洗仪器。 柱子配置:选择合适的柱子和固定相,安装到仪器中。 样品预处理:依据样品特性进行提取、浓缩、过滤等处理。
根据样品的性质选择合适的色谱柱和流动相。 对样品进行前处理,如稀释、过滤等。 开启HPLC仪器,设置合适的操作参数,如流速、温度等。 将处理后的样品注入进样针,开始分析。 通过检测器获取色谱图,利用相关软件进行分析。 分析完毕后,关闭仪器,进行必要的清洁和维护。
色谱法的基本原理 色谱法是一种分离技术,通过物质在固定相和流动相之间的分配差异来实现分离。在高效液相色谱仪中,固定相通常是色谱柱中的填料或涂层,而流动相则是经过高压泵驱动在色谱柱中流动的液体。
液相色谱仪的使用步骤??
液相色谱仪的使用步骤口诀为开机、超声、排气、走基线。开机前先将流动相过滤和超声:水流动相用混合滤膜(0.2μm)过滤,有机流动相用有机滤膜过滤,之后超声脱气15-20分钟。
液相色谱仪使用,遵循口诀操作,条理清晰很重要。第一步,开启机器,滤液准备,超声脱气。流动相过滤,去除杂质,保护色谱柱。有机相滤膜,专一过滤,脱气过程,排除气体。机器开启后,流动相置位,泵启排气,检测器随后开。排气完成,关闭阀门,有机相冲洗,柱子清洁。水相随后跟上,流速控制,基线稳定。
开启电脑。2 开启液相色谱各模块的电源。3 双击桌面“仪器—联机”,进入联机界面。4 排气:1 手动旋开泵处冲洗阀(逆时针旋转约1圈)。2 右键单击“泵”图标区域,选择“方法…”选项,进入泵配比编辑画面,设流速:5ml/min(通常为3-5ml/min),点击“确定”。
色谱柱准备 色谱柱是液相色谱中的核心部分,通常由内壁抛光的不锈钢管构成,内径约为4-5毫米,长度在100至250毫米之间。在使用前,需要按照气相色谱法清洗空柱,并通过匀浆法装填固定相。将色谱柱安装到仪器管路中,使用柱式机械往复泵输送脱气的流动相。